Jedan svet jedna borba
─Međunarodna saradnja za izgradnju globalne zajednice zajedničke sudbine koja odgovara na izazove pandemije COVID-19
Novi korona virus koji je zahvatio svijet rezultirao je kontinuiranom globalnom krizom pandemije COVID-19.Novi korona virus nema granica, nijedna zemlja neće biti pošteđena ove bitke protiv COVID-19.Kao odgovor na ovu svjetsku pandemiju COVID-19, Liming Bio-Products Corp daje doprinos za podršku dobrobiti naših globalnih zajednica.
Naš svijet je trenutno suočen sa neviđenim uticajem pandemije nove bolesti korona virusa 2019 (COVID-19).Do danas ne postoji efikasan lijek za liječenje ove bolesti.Međutim, razvijeni su mnogi dijagnostički testovi za otkrivanje COVID-19.Ovi testovi se temelje na molekularnim ili serološkim metodama za otkrivanje novih biomarkera nukleinske kiseline ili antitijela specifičnih za koronavirus.Kako je COVID-19 dostigao status pandemije, rana dijagnoza nove infekcije koronavirusom ključna je za procjenu širenja virusa i njegovo suzbijanje, ali savršen test za univerzalnu upotrebu još ne postoji.Moramo znati koji se testovi potencijalno mogu koristiti za skrining, dijagnozu i praćenje infekcije COVID-19 i koja su njihova ograničenja.Veoma je važno kako bolje iskoristiti ove naučne alate i pomoći u identifikaciji i kontroli pojave ove ozbiljne bolesti koja se brzo širi.
Svrha otkrivanja novog koronavirusa je utvrditi ima li osoba koja ima infekciju COVID-19 ili asimptotični nosilac koji može tiho širiti virus, kako bi se pružile bitne informacije za usmjeravanje donošenja odluka o kliničkom liječenju.Prethodne studije su pokazale da 70% kliničkih odluka ovisi o rezultatima testiranja.Kada se koriste različite metode detekcije, zahtjevi kompleta reagenasa za detekciju su također različiti.
Slika 1
Slika 1:Dijagram koji prikazuje ključne faze općih nivoa biomarkera tokom tipičnog vremenskog toka infekcije COVID-19.X-osa označava broj dana infekcije, a Y-osa označava virusno opterećenje, koncentraciju antigena i koncentraciju antitijela u različitim periodima.Antitijelo se odnosi na IgM i IgG antitijela.I RT-PCR i detekcija antigena se koriste za otkrivanje prisutnosti ili odsustva novog koronavirusa, što je direktan dokaz za rano otkrivanje pacijenata.Unutar jedne sedmice nakon virusne infekcije, PCR detekcija ili detekcija antigena je poželjna.Nakon infekcije novim korona virusom oko 7 dana, IgM antitijelo protiv novog koronavirusa postepeno se povećava u krvi pacijenta, ali trajanje postojanja je kratko, a njegova koncentracija brzo opada.Nasuprot tome, IgG antitijelo protiv virusa pojavljuje se kasnije, obično oko 14 dana nakon infekcije virusom.Koncentracija IgG postupno raste, te se dugo zadržava u krvi.Dakle, ako se IgM otkrije u krvi pacijenta, to znači da je virus nedavno zaražen, što je rani marker infekcije.Kada se u krvi pacijenta otkrije IgG antitijelo, to znači da virusna infekcija postoji već neko vrijeme.Naziva se i kasna infekcija ili prethodna infekcija.Često se viđa kod pacijenata koji su u fazi oporavka.
Biomarkeri novog korona virusa
Novi koronavirus je RNA virus, koji se sastoji od proteina i nukleinskih kiselina.Virus napada (ljudsko) tijelo domaćina, ulazi u ćelije preko mjesta vezivanja odgovarajućeg receptora ACE2 i replicira se u ćelijama domaćina, uzrokujući da ljudski imuni sistem odgovori na strane napadače i proizvodi specifična antitijela.Stoga se nukleinske kiseline i antigeni u bočici te specifična antitijela protiv novog koronavirusa teoretski mogu koristiti kao specifični biomarkeri za otkrivanje novog koronavirusa.Za detekciju nukleinskih kiselina najčešće se koristi RT-PCR tehnologija, dok se serološke metode obično koriste za otkrivanje novih antitijela specifičnih za koronavirus.Trenutno su dostupne različite metode testiranja koje možemo odabrati za testiranje infekcije COVID-19 [1].
Osnovni principi glavnih metoda testiranja na novi korona virus
Do sada su dostupni mnogi dijagnostički testovi za COVID_19, a svaki dan više testnih kompleta dobiva odobrenje za korištenje u hitnim slučajevima.Iako novi razvoji testova izlaze s toliko različitih imena i formata, svi trenutni testovi COVID_19 u osnovi se oslanjaju na dvije glavne tehnologije: detekciju nukleinske kiseline za virusnu RNK i serološke imunotestove koji otkrivaju antitijela specifična za virus (IgM i IgG).
01. Detekcija nukleinske kiseline
Lančana reakcija reverzne transkripcije-polimeraze (RT-PCR), izotermna amplifikacija posredovana petljom (LAMP) i sekvenciranje sljedeće generacije (NGS) uobičajene su metode nukleinskih kiselina za detekciju nove RNK koronavirusa.RT-PCR je prva vrsta testa na COVID-19, koju preporučuju i Svjetska zdravstvena organizacija (WHO) i američki centar za kontrolu i prevenciju bolesti (CDC).
02. Serološka detekcija antitela
Antitijelo je zaštitni protein koji se proizvodi u ljudskom tijelu kao odgovor na infekciju virusom.IgM je rani tip antitela, dok je IgG kasniji tip antitela.Uzorak seruma ili plazme obično se ispituje na prisustvo specifičnih IgM i IgG tipova antitijela za procjenu akutne i rekonvalescentne faze infekcije COVID-19.Ove metode detekcije zasnovane na antitijelima uključuju imunohromatografiju koloidnog zlata, imunohromatografiju lateksom ili fluorescentnom mikrosferom, enzimski imunosorbentni test (ELISA) i hemiluminiscencijski test.
03. Detekcija virusnog antigena
Antigen je struktura na virusu koju prepoznaje ljudsko tijelo i koja pokreće imunološki odbrambeni sistem da proizvodi antitijela za uklanjanje virusa iz krvi i tkiva.Virusni antigen prisutan na virusu može se ciljati i detektirati korištenjem imunotesta.Poput virusne RNK, virusni antigeni su također prisutni u respiratornom traktu zaraženih osoba i mogu se koristiti za dijagnosticiranje akutne faze infekcije COVID-19.Stoga se često preporučuje uzimanje uzoraka iz gornjih disajnih puteva kao što su pljuvačka, nazofaringealni i orofaringealni brisevi, ispljuvak dubokog kašlja, tečnost bronhoalveolarnog ispiranja (BALF) za početno testiranje na antigen.
Odabir metoda testiranja na novi korona virus
Odabir metode testiranja uključuje mnoge faktore, uključujući kliničko okruženje, kontrolu kvaliteta ispitivanja, vrijeme obrade, troškove testiranja, metode prikupljanja uzoraka, tehničke zahtjeve laboratorijskog osoblja, zahtjeve za objekte i opremu.Detekcija nukleinskih kiselina ili virusnih antigena mora pružiti direktan dokaz o prisutnosti virusa i potvrditi dijagnozu nove infekcije koronavirusom.Iako postoji mnogo metoda za detekciju antigena, njihova osjetljivost na detekciju novog koronavirusa je teoretski niža od one RT-PCR amplifikacije.Testiranje na antitijela je otkrivanje antivirusnih antitijela proizvedenih u ljudskom tijelu, koja kasne u vremenu i često se ne mogu koristiti za rano otkrivanje tokom akutne faze virusne infekcije.Klinička postavka za primjenu detekcije može varirati, a mjesta za prikupljanje uzoraka također mogu biti različita.Za detekciju virusnih nukleinskih kiselina i antigena, uzorak se mora uzeti u respiratornom traktu gdje je virus prisutan, kao što su brisevi nazofarinksa, orofaringealni brisevi, sputum ili tečnost za bronhoalveolarnu lavažu (BALF).Za detekciju na bazi antitijela potrebno je uzeti uzorak krvi i ispitati ga na prisustvo specifičnih antivirusnih antitijela (IgM/IgG).Međutim, rezultati testa na antitijela i nukleinske kiseline mogu se međusobno nadopunjavati.Na primjer, kada je rezultat testiranja negativan na nukleinsku kiselinu, negativan IgM, ali IgG pozitivan, ovi rezultati ukazuju na to da pacijent trenutno ne nosi virus, ali da se oporavio od nove infekcije koronavirusom.[2]
Prednosti i nedostaci novih testova na koronavirus
U Protokolu o dijagnostici i liječenju nove pneumonije od koronavirusa (probna verzija 7) (objavila Nacionalna zdravstvena komisija i Državna uprava za tradicionalnu kinesku medicinu 3. marta 2020.), testiranje nukleinske kiseline koristi se kao zlatni standard za dijagnozu novog korona virusom, dok se testiranje na antitijela također smatra jednom od metoda potvrde dijagnoze.
Patogeni i serološki nalazi
(1) Patogeni nalazi: Nova nukleinska kiselina koronavirusa može se otkriti u brisevima nazofarinksa, sputumu, sekretima donjih respiratornih puteva, krvi, fecesu i drugim uzorcima pomoću RT-PCRand/ili NGS metoda.Preciznije je ako se uzorci uzimaju iz donjeg respiratornog trakta (sputum ili ekstrakcija iz vazdušnog trakta).Uzorke treba dostaviti na testiranje što je prije moguće nakon uzimanja.
(2) Serološki nalazi: IgM specifičan za NCP virus postaje detektabilan oko 3-5 dana nakon početka;IgG postiže titraciju od najmanje 4 puta povećanja tokom rekonvalescencije u poređenju sa akutnom fazom.
Međutim, odabir metoda testiranja ovisi o geografskim lokacijama, medicinskim propisima i kliničkim uvjetima.U SAD-u, NIH je izdao Smjernice za liječenje korona virusne bolesti 2019. (COVID-19) (stranica ažurirana: 21. aprila 2020.), a FDA je izdala Politiku za dijagnostičke testove za bolest korona virusa-2019 tokom vanredne situacije u javnom zdravstvu (objavljena 16. marta 2020.). ), u kojem je serološko testiranje IgM/IgG antitijela odabrano samo kao skrining test.
Metoda detekcije nukleinske kiseline
RT_PCR je visoko osjetljiv test nukleinske kiseline dizajniran da otkrije da li je nova RNK koronavirusa prisutna u respiratornom ili drugom uzorku.Pozitivan rezultat PCR testa znači prisustvo nove RNK koronavirusa u uzorku za potvrdu infekcije COVID-19.Negativan rezultat PCR testa ne znači odsustvo virusne infekcije jer na nju može uticati loš kvalitet uzorka ili vremenska tačka bolesti u fazi oporavka, itd.Iako je RT-PCR veoma osjetljiv test, ima nekoliko nedostataka.RT-PCR testovi mogu biti radno intenzivni i dugotrajni, što u velikoj mjeri ovisi o visokom kvalitetu uzorka.Ovo može biti izazov jer količina virusne RNK ne samo da jako varira između različitih pacijenata, već može varirati i unutar istog pacijenta u zavisnosti od vremenskih tačaka kada se uzorak prikuplja, kao i faza infekcije ili početka kliničkih simptoma.Za otkrivanje novog koronavirusa potrebni su visokokvalitetni uzorci koji sadrže dovoljnu količinu netaknute virusne RNK.
RT-PCR test može dati netačan negativan rezultat (lažno negativan) za neke pacijente koji imaju infekciju COVID-19.Kao što znamo, glavna mjesta infekcije novog koronavirusa nalaze se u plućima i donjem respiratornom traktu, kao što su alveole i bronhi.Stoga se smatra da je uzorak sputuma iz dubokog kašlja ili tečnost bronhoalveolarne lavaže (BALF) najosjetljiviji za otkrivanje virusa.Međutim, u kliničkoj praksi uzorci se često uzimaju iz gornjih disajnih puteva korištenjem nazofaringealnih ili orofaringealnih briseva.Sakupljanje ovih uzoraka nije samo neugodno za pacijente, već zahtijeva i posebno obučeno osoblje.Kako bi uzimanje uzoraka bilo manje invazivno ili lakše, u nekim slučajevima pacijentima se može dati oralni bris i omogućiti im da sami uzmu uzorak sa sluznice usne ili jezika.Bez dovoljno virusne RNK, RT-qPCR može dati lažno negativan rezultat testa.U provinciji Hubei, Kina, RT-PCR osjetljivost u početnoj detekciji prijavljena je samo oko 30% -50%, sa prosjekom od 40%.Visoka stopa lažno negativnih je najvjerovatnije uzrokovana nedovoljnim uzorkovanjem.
Osim toga, RT-PCR test zahtijeva visoko obučeno osoblje za izvođenje složenih koraka ekstrakcije RNK i procedure PCR amplifikacije.Takođe zahteva viši nivo biološke zaštite, posebnu laboratoriju i PCR instrument u realnom vremenu.U Kini, RT-PCR test za otkrivanje COVID-19 treba da se izvede u laboratorijama nivoa 2 biološke sigurnosti (BSL-2), uz zaštitu osoblja koristeći praksu nivoa biološke sigurnosti 3 (BSL-3).Prema ovim zahtjevima, od početka januara do početka februara 2020., kapacitet laboratorije CDC u China Wuhanu mogao je otkriti samo nekoliko stotina slučajeva dnevno.Normalno, to ne bi bio problem kada se testiraju druge zarazne bolesti.Međutim, kada se suočavamo s globalnom pandemijom kao što je COVID-19 s potencijalno milionima ljudi za testiranje, RT-PCR postaje kritično pitanje zbog zahtjeva za posebnim laboratorijskim objektima ili tehničkom opremom.Ovi nedostaci mogu ograničiti RT-PCR da se koristi kao efikasan alat za skrining, a takođe mogu dovesti do kašnjenja u izvještajima o rezultatima testiranja.
Serološka metoda detekcije antitijela
Sa napredovanjem toka bolesti, posebno u srednjim i kasnim stadijumima, stopa detekcije antitela je veoma visoka.Studija u bolnici Central South Wuhan pokazala je da bi stopa otkrivanja antitijela mogla dostići više od 90% u trećoj sedmici infekcije COVID-19.Također, antitijelo je proizvod ljudskog imunološkog odgovora na novi koronavirus.Test na antitijela nudi nekoliko prednosti u odnosu na RT-PCR.Prvo, serološki testovi na antitijela su jednostavni i brzi.Testovi bočnog protoka antitijela mogu se koristiti za pružanje njege za 15 minuta.Drugo, cilj detektovan serološkim testom je antitelo, za koje se zna da je mnogo stabilnije od virusne RNK.Tokom sakupljanja, transporta, skladištenja i testiranja, uzorci za testove na antitela su generalno stabilniji od uzoraka za RT-PCR.Treće, pošto je antitijelo ravnomjerno raspoređeno u cirkulaciji, manje je varijacija uzorkovanja u poređenju sa testom nukleinske kiseline.Volumen uzorka potreban za test na antitela je relativno mali.Na primjer, 10 mikrolitara krvi iz uboda prsta dovoljno je za korištenje u testu bočnog protoka antitijela.
Općenito, test na antitijela je odabran kao dodatak za detekciju nukleinske kiseline kako bi se poboljšala stopa otkrivanja novog koronavirusa tokom tokova bolesti.Kada se test na antitijela koristi zajedno s testom nukleinske kiseline, može povećati točnost testa za dijagnozu COVID-19 smanjenjem potencijalnih lažno pozitivnih i lažno negativnih rezultata.Trenutni vodič za rad ne preporučuje korištenje dvije vrste testa odvojeno kao nezavisnog formata detekcije, već bi se trebao koristiti kao kombinovani format.[2]
Slika 2:Ispravno tumačenje rezultata testa nukleinske kiseline i antitijela za otkrivanje nove infekcije koronavirusom
Slika 3:Liming Bio-Products Co., Ltd. – Komplet za dvostruko brzo testiranje IgM/IgG antitijela na novi koronavirus (StrongStep®Brzi test na SARS-CoV-2 IgM/IgG antitela, lateks imunohromatografija)
Slika 4:Liming Bio-Products Co., Ltd. – StrongStep®Novi Coronavirus (SARS-CoV-2) Multiplex PCR komplet u realnom vremenu (detekcija za tri gena, metoda fluorescentne sonde).
Bilješka:Ovaj visoko osjetljiv, spreman za upotrebu PCR komplet dostupan je u liofiliziranom formatu (proces sušenja zamrzavanjem) za dugotrajno skladištenje.Komplet se može transportovati i čuvati na sobnoj temperaturi i stabilan je godinu dana.Svaka epruveta premiksa sadrži sve reagense potrebne za PCR amplifikaciju, uključujući reverznu transkriptazu, Taq polimerazu, prajmere, sonde i dNTPs supstrate. Korisnici mogu jednostavno rekonstituirati mješavinu dodavanjem vode za PCR zajedno sa šablonom i zatim učitati na PCR instrument za pokretanje amplifikacije.
Kao odgovor na novu epidemiju koronavirusa, Liming Bio-Products Co., Ltd. je brzo radio na razvoju dva dijagnostička kompleta kako bi omogućili kliničkim i javnozdravstvenim laboratorijama da brzo dijagnosticiraju infekciju COVID-19.Ovi kompleti su vrlo pogodni za korištenje za široke skrininge u zemljama i regijama u kojima se epidemija novog koronavirusa brzo širi, te za postavljanje dijagnoze i potvrde infekcije COVID-19.Ovi kompleti su za upotrebu samo pod prethodno obavještenim odobrenjem za hitnu upotrebu (PEUA).Testiranje je ograničeno na laboratorije certificirane prema propisima nacionalnih ili lokalnih vlasti.
Metoda detekcije antigena
1. Detekcija virusnog antigena je klasifikovana u istoj kategoriji direktne detekcije kao i detekcija nukleinske kiseline.Ove metode direktne detekcije traže dokaze o virusnim patogenima u uzorku i mogu se koristiti za potvrdu dijagnoze.Međutim, razvoj kompleta za detekciju antigena zahtijeva visoku kvalitetu monoklonskih antitijela sa jakim afinitetom i visokom osjetljivošću sposobna prepoznati i uhvatiti patogene viruse.Obično je potrebno više od šest mjeseci za odabir i optimizaciju monoklonskog antitijela pogodnog za upotrebu u pripremi kompleta za detekciju antigena.
2. Trenutno su reagensi za direktno otkrivanje novog korona virusa još uvijek u fazi istraživanja i razvoja.Stoga, nijedan komplet za detekciju antigena nije klinički validiran i komercijalno dostupan.Iako je ranije objavljeno da je dijagnostička firma u Shenzhenu razvila komplet za detekciju antigena i klinički testirana u Španiji, pouzdanost i tačnost testa nije mogla biti potvrđena zbog prisutnosti problema s kvalitetom reagensa.Do danas, NMPA (bivša kineska FDA) još nije odobrila nijedan komplet za detekciju antigena za kliničku upotrebu.U zaključku, razvijene su različite metode detekcije.Svaka metoda ima svoje prednosti i ograničenja.Rezultati različitih metoda mogu se koristiti za verifikaciju i dopunu.
3. Proizvodnja kvalitetnog kompleta za testiranje na COVID-19 snažno ovisi o optimizaciji tijekom istraživanja i razvoja.Liming Bio-Product Co., Ltd.testni setovi su potrebni da zadovolje stroge standarde proizvodnje i kontrole kvaliteta kako bi se osiguralo da pružaju najviši nivo performansi i konzistentnosti.Naučnici u Liming Bio-Product Co., Ltd. imaju više od dvadeset godina iskustva u dizajniranju, testiranju i optimizaciji in vitro dijagnostičkih kompleta kako bi se osigurao najviši nivo performansi u analitičkoj kvantifikaciji.
Tokom pandemije COVID-19, kineska vlada se suočila sa porastom ogromne potražnje za materijalima za prevenciju epidemije na međunarodnim žarištima.Dana 5. aprila, na konferenciji za novinare Zajedničkog mehanizma za prevenciju i kontrolu Državnog vijeća „Jačanje upravljanja kvalitetom medicinskih materijala i regulisanje poretka na tržištu“, Jiang Fan, inspektor prvog nivoa Odjeljenja za vanjsku trgovinu Ministarstva Commerce-a, rekao je: „Sljedeće ćemo usmjeriti naše napore na dva aspekta, prvo, da ubrzamo podršku većem broju medicinskih potrepština potrebnih međunarodnoj zajednici, kao i da poboljšamo kontrolu kvaliteta, regulaciju i upravljanje proizvodima. Daćemo doprinos Kine zajedničkom odgovoru na globalnu epidemiju i izgradnji zajednice sa zajedničkom budućnošću za čovečanstvo.
Slika 5:Novi reagens za koronavirus kompanije Liming Bio-Products Co., Ltd. dobio je certifikat o registraciji EU CE
Počasno priznanje
Houshenshan
Slika 6. Liming Bio-Products Co., Ltd. podržao je planinsku bolnicu Wuhan Vulcan (HouShenShan) u borbi protiv epidemije COVID-19 i dobio je počasni certifikat Crvenog križa Wuhan.Planinska bolnica Wuhan Vulcan je najpoznatija bolnica u Kini koja je specijalizovana za liječenje teških pacijenata sa COVID-19.
Kako se nova epidemija koronavirusa nastavlja širiti svijetom, Nanjing Liming Bio-Products Co., Ltd. pojačava podršku i pomaže zajednicama širom svijeta pomoću naših inovativnih tehnologija u borbi protiv ove globalne prijetnje bez presedana.Brzo testiranje na infekciju COVID-19 kritičan je dio rješavanja ove prijetnje.Nastavljamo da doprinosimo na značajan način pružanjem visokokvalitetnih dijagnostičkih platformi u ruke zdravstvenih radnika kako bi ljudi mogli dobiti kritične rezultate testiranja koji su im potrebni.Napori Liming Bio-products Co., Ltd. u borbi protiv pandemije COVID-19 su da svojim tehnologijama, iskustvima i stručnošću doprinesemo međunarodnim zajednicama za izgradnju globalne zajednice sudbine.
Dugo pritisnite ~Skeniraj i pratite nas
Email: sales@limingbio.com
Web stranica: https://limingbio.com
Vrijeme objave: 01.05.2020
