Koja je najbolja metoda?
—Testovi za dijagnostiku infekcije SARS-CoV-2
Za potvrđene slučajeve COVID-19, prijavljeni uobičajeni klinički simptomi uključuju groznicu, kašalj, mijalgiju ili umor.Ipak, ovi simptomi nisu jedinstvene karakteristike COVID-19 jer su ovi simptomi slični simptomima drugih bolesti zaraženih virusom poput gripe.Trenutno su PCR u realnom vremenu virusne nukleinske kiseline (rt-PCR), CT i neki hematološki parametri primarni alati za kliničku dijagnozu infekcije.Kineski CDC razvio je i koristio mnoge laboratorijske testove za testiranje uzoraka pacijenata na COVID-19.1, američki CDC2i druge privatne kompanije.Test na IgG/IgM antitijela, serološka metoda testiranja, također je dodat kao dijagnostički kriterij u kinesku ažuriranu verziju smjernica za dijagnozu i liječenje nove korona virusne bolesti (COVID-19), koja je objavljena 3. marta.1.rt-PCR test virusne nukleinske kiseline i dalje je trenutna standardna dijagnostička metoda za dijagnozu COVID-19.
StrongStep®Novi Coronavlrus (SARS-COV-2) Multipleks PCR komplet u realnom vremenu (detekcija za tri gena)
Ipak, ovi kompleti za PCR test u stvarnom vremenu, koji traže genetski materijal virusa, na primjer u nazalnim, oralnim ili analnim brisevima, pate od brojnih ograničenja:
1) Ovi testovi imaju dugo vremena i komplikovani su u radu;općenito im je potrebno u prosjeku 2 do 3 sata da generiraju rezultate.
2) PCR testovi zahtevaju sertifikovane laboratorije, skupu opremu i obučene tehničare za rad.
3) Postoji određeni broj lažno negativnih rezultata za rt-PCR COVID-19.To može biti uzrokovano niskim SARS-CoV-2 virusnim opterećenjem u uzorku brisa gornjih dišnih puteva (Novi koronavirus uglavnom inficira donje respiratorne puteve, kao što su plućne alveole) i test ne može identificirati ljude koji su prošli kroz infekciju, oporavili se i očistili virus iz svojih tijela.
Istraživanje Lirong Zoua et al4otkrili su da je veće virusno opterećenje otkriveno ubrzo nakon pojave simptoma, s većim virusnim opterećenjem otkrivenim u nosu nego u grlu, a obrazac izlučivanja virusne nukleinske kiseline kod pacijenata zaraženih SARS-CoV-2 nalikuje onom kod pacijenata s gripom4i izgleda drugačije od onog kod pacijenata zaraženih SARS-CoV-2.
Yang Pan i dr5ispitali su serijske uzorke (bris grla, sputum, urin i stolica) od dva pacijenta u Pekingu i otkrili da je virusno opterećenje u brisu grla i uzorcima sputuma dostiglo vrhunac oko 5-6 dana nakon pojave simptoma, uzorci sputuma općenito su pokazali veće virusno opterećenje od uzorci brisa grla.U uzorcima urina ili stolice kod ova dva pacijenta nije otkrivena virusna RNK.
PCR test daje pozitivan rezultat samo kada je virus još uvijek prisutan.Testovi ne mogu identificirati ljude koji su prošli kroz infekciju, oporavili se i očistili od virusa iz svojih tijela.Zapravo, samo je oko 30% -50% bilo pozitivno na PCR kod pacijenata s klinički dijagnostikovanom novom koronavirusnom pneumonijom.Mnogim pacijentima s novom korona virusnom upalom pluća ne može se dijagnosticirati zbog negativnog testa na nukleinsku kiselinu, pa ne mogu na vrijeme dobiti odgovarajući tretman.Od prvog do šestog izdanja smjernica, oslanjajući se isključivo na dijagnozu rezultata testa nukleinske kiseline, što je izazvalo velike probleme kliničarima. Najraniji "zviždač", dr. Li Wenliang, oftalmolog u Wuhan Centralu Bolnica je mrtva.Za života je imao tri testa nukleinske kiseline u slučaju povišene temperature i kašlja, a posljednji put je dobio PCR pozitivne rezultate.
Nakon rasprave stručnjaka, odlučeno je da se povećaju metode ispitivanja seruma kao novi dijagnostički kriterij.Dok testovi na antitijela, koji se nazivaju i serološki testovi, mogu potvrditi da li je neko zaražen čak i nakon što je njegov imunološki sistem očistio virus koji uzrokuje COVID-19.
Rapid Test StrongStep® SARS-COV-2 IgG/IgM antitela
Test na IgG/IgM antitijela pomoći će da se na mnogo populacijski način uđe u trag ko je imao infekciju, jer se čini da se mnogi slučajevi prenose od asimptomatskih pacijenata koji se ne mogu lako identificirati.Par u Singapuru, muž je bio pozitivan na PCR, rezultat PCR testa njegove supruge je bio negativan, ali rezultati testa na antitela su pokazali da ona ima antitela, kao i njen muž.
Serološki testovi moraju biti pažljivo validirani kako bi bili sigurni da reaguju pouzdano, ali samo na antitijela protiv novog virusa.Jedna od zabrinutosti bila je da sličnost između virusa koji uzrokuju teški akutni respiratorni sindrom i COVID-19 može dovesti do unakrsne reaktivnosti.IgG-IgM koji je razvio Xue Feng wang6smatralo se da se može koristiti kao test na licu mjesta (POCT), jer se može izvesti u blizini kreveta krvlju iz prstiju.Komplet ima osjetljivost od 88,66% i specifičnost od 90,63%.Međutim, i dalje je bilo lažno pozitivnih i lažno negativnih rezultata.
U kineskoj ažuriranoj verziji smjernica za dijagnozu i liječenje nove korona virusne bolesti (COVID-19)1, potvrđeni slučajevi se definiraju kao sumnjivi slučajevi koji ispunjavaju bilo koji od sljedećih kriterija:
(1) Uzorci respiratornog trakta, uzorci krvi ili stolice pozitivni na SARS-CoV-2 nukleinsku kiselinu pomoću rt-PCR;
(2) Genetsko sekvenciranje virusa iz uzoraka respiratornog trakta, krvi ili stolice je visoko homologno sa poznatim SARS-CoV-2;
(3) IgM antitijela i IgG antitijela za novi korona virus su bili pozitivni;
(4) Serumsko novo IgG antitijelo specifično za koronavirus promijenjeno iz negativnog u pozitivno ili IgG antitijelo specifično za koronavirus tokom perioda oporavka je 4 puta veće nego u akutnom periodu.
Dijagnoza i liječenje COVID-19
| Smjernice | Objavljeno | Potvrđeni dijagnostički kriterijumi |
| Verzija 7 | 3mar.2020 | ❶ PCR ❷ NGS ❸ IgM+IgG |
| Verzija 6 | 18. februar 2020 | ❶ PCR ❷ NGS |
Referenca
1. Smjernice za dijagnozu i liječenje nove pneumonije od koronavirusa (probna verzija 7, Nacionalna zdravstvena komisija Narodne Republike Kine, izdata 3. marta 2020.)
http://www.nhc.gov.cn/yzygj/s7652m/202003/a31191442e29474b98bfed5579d5af95.shtml
2. Istraživanja koriste samo RT-PCR protokol u realnom vremenu za identifikaciju 2019-nCoV
https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/lab/rt-pcr-detection-instructions.html
3. Singapur tvrdi da je prvi put koristio test na antitijela za praćenje infekcija koronavirusom
https://www.sciencemag.org/news/2020/02/singapore-claims-first-use-antibody-test-track-coronavirus-infections
4. SARS-CoV-2 Virusno opterećenje u uzorcima gornjih dišnih puteva zaraženih pacijenata 19. februara 2020. DOI: 10.1056/NEJMc2001737
5. Virusne količine SARS-CoV-2 u kliničkim uzorcima Lancet Infect Dis 2020 Objavljeno online 24. februara 2020. (https://doi.org/10.1016/S1473-3099(20)30113-4)
6. Razvoj i klinička primjena brzog IgM-IgG kombinovanog testa antitijela na SARS-CoV-2
Dijagnoza infekcije XueFeng Wang ORCID ID: 0000-0001-8854-275X
Vrijeme objave: 17.03.2020
